کاربرد تکنیک Triplex PCR در شناسایی تیپ های B،C و D کلستریدیوم پرفرینجنس

پژوهشهای علوم دامی ایران

مقاله 8، دوره 2، شماره 2 - شماره پیاپی 4، تیر 1389   

نوع مقاله: مقالات علمی- پژوهشی

شناسه دیجیتال (DOI): 10.22067/ijasr.v2i2.4106

نویسندگان

محمد رضا احسنی^{* 1}؛ محمدرضا محمدآبادی²؛ مهرداد شمس الدینی بافتی³؛ مجید عزتخواه³؛ مهدی حسنی درخشان³؛ علی اسمعیلی زاده کشکوئیه²

¹گروه ژنتیک و اصلاح نزاد دام، گروه علوم دامی، دانشگاه شهید باهنر کرمان، کرمان، ایران

²گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید باهنر کرمان، کرمان، ایران

³موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، شعبه جنوب شرقی کشور، کرمان، ایران

چکیده

در این مطالعه 130 نمونه مدفوع از گوسفندان نژاد کرمانی اطراف کرمان بطور تصادفی گرفته شد. پس از فرآوری و کشت نمونه ها، کلونی های حاصل از نظر مورفولوژی و رنگ آمیزی بررسی شدند و با استفاده از آزمون های بیوشیمیایی، گونه های آنها شناسایی شد. کلستریدیوم های جدا شده 30 درصد نمونه ها را شامل می شدند که عبارت بودند از کلستریدیوم های پرفرینجنس، باراتی، ابسونیوم، بیفرمنتانس، اسپورجنس، لپتوم، اورانتی-بوتریکوم، اسپوراسفیریدس، سیمبی زوم، اسکاتولوجنس، راموزوم و سردلی. عمل استخراج DNA بر روی 39 باکتری جدا شده انجام گردید و جهت تعیین تیپ باکتری ها، DNA های استخراج شده با Triplex PCR آزمون شدند. در آخر نوع توکسین و در نتیجه تیپ های این باکتری بر اساس طول قطعه سنتز شده در PCR، شناسایی گردید که از 23 نمونه کلستریدیوم پرفرینجنس که با آزمون های بیوشیمیایی جدا شده بودند، همگی قطعه 324bp را ایجاد کردند. از این تعداد 5 مورد تیپ B، 8 مورد تیپ C و 6 مورد تیپ D تشخیص داده شد.

کلیدواژه‌ها

کلستریدیوم پرفرینجنس؛ آزمایش های بیوشیمیایی؛ DNA؛ Triplex PCR