بهینه‌سازی روش‌های مولکولی شناسایی نماتد عامل ریشه‌گره‌ای (Meloidogyne javanica) | ||
| پژوهش های حفاظت گیاهان ایران | ||
| مقاله 3، دوره 34، شماره 3 - شماره پیاپی 49، پاییز 1399، صفحه 309-324 اصل مقاله (943.15 K) | ||
| نوع مقاله: مقالات پژوهشی | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.22067/jpp.v34i3.84588 | ||
| نویسندگان | ||
| رحمان کشاورز کوهجردی* 1؛ علی پاک نیت جهرمی2؛ مهرزاد هنرور3؛ مجید پاک نیت جهرمی2 | ||
| 1رشته مهندسی کشاورزی علوم باغبانی، بیوتکنولوژی و ژنتیک مولکولی محصولات باغبانی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد استهبان | ||
| 2بخش تحقیقات گیاه‌پزشکی، مرکز تحقیقات و آموزش کشاورزی و منابع طبیعی فارس، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، زرقان، ایران | ||
| 3دانشگاه آزاد اسلامی واحد استهبان، گروه بیوتکنولوژی و ژنتیک مولکولی محصولات باغبانی، استهبان، ایران | ||
| چکیده | ||
| به منظور شناسایی سریع مراحل مختلف رشدی گونه Meloidogyne javanica که در ایران به عنوان یکی از خسارتزاترین نماتدهای گیاهی شناخته شده، تعداد 40 نمونه خاک و ریشه آلوده به نماتد ریشه‌گره‌ای از نقاط مختلف جالیزکاری استان فارس (داراب، جنت شهر، استهبان، نورآباد، کوار و شیراز) جمع‌آوری گردید. پس از خالص‌سازی به روش تک کیسه تخم روی ریشه گوجه فرنگی رقم Rutgers و شناسایی گونه M. javanica بر اساس ویژگی‌های ریخت‌شناسی (مورفولوژی) و ریخت‌سنجی ماده‌های بالغ و لارو سن دوم، DNA ژنومی کلیه مراحل رشدی از مرحله تخم، لارو سن دوم و ماده‌های بالغ نماتد، به سه روش ژانگ، سیلوا و لیوآ استخراج شد. DNA استخراج شده با کمک جفت آغازگرهای اختصاصی گونه Fjav/Rjav, Mj-MF/Mj-MR, Mj-DF/Mj-DR تکثیر گردید. در کلیه مراحل رشدی گونه M. javanica یک قطعه 1650 جفت بازی توسط جفت آغازگر Mj-DF/Mj-DR ، یک قطعه 517 جفت بازی توسط جفت آغازگر Mj-MF/Mj-MR و یک قطعه 670 جفت بازی توسط جفت آغازگر Fjav/Rjav تکثیر شد ولی این قطعات با جفت آغازگر MI-F و MI-R، مربوط به نماتد M. incognita و آب که به عنوان کنترل منفی در آزمایش استفاده شده بودند تکثیر نشدند. لذا به نظر می‌رسد کاربرد این جفت آغازگرها در قیاس با خصوصیات ریخت‌شناسی در مراحل مختلف رشدی نماتد به تشخیص سریع تر گونه M. javanica منجر می‌شود. در بهینه‌سازی PCR برای تشخیص نماتد M. javanica بهترین دما برای آغازگرهای Mj-MF و Mj-MR، 56 درجه سانتی‌گراد برای Mj-DF و Mj-DR، 50 درجه سانتی‌گراد و برای Fjav و Rjav، 54 درجه سانتی‌گراد تعیین گردید، میزان DNA الگو حاصل از روش‌های مختلف استخراج در آزمون PCR در خصوص ماده کامل و کیسه تخم از یک میکرولیتر به دو میکرولیتر و لارو سن دوم از دو میکرو لیتر به چهار میکرولیتر بهترین نتیجه حاصل شد. در خصوص MgCl2 با افزایش میزان آن از 5/1 میلی‌مولار به 2 میلی‌مولار در واکنش 25 میکرولیتری PCR بهترین نتیجه حاصل گردید. بهترین روش استخراج که قادر به ردیابی تک لارو سن دوم نماتد بود روش لیوآ در نظر گرفته شد. بهترین آغازگرها که قادر به ردیابی نماتد M. javanicaدر تمام مراحل رشدی بودند، جفت آغازگرMj-MF/Mj-MR و Fjav/Rjav بودند. | ||
| کلیدواژه‌ها | ||
| آغازگر اختصاصی؛ بهینه سازی PCR؛ نماتد ریشه گرهی؛ M. javanica | ||
| مراجع | ||
|
| ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 5,086 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 2,670 |
||