شناسایی و تعیین پراکنش ویروس A سیب زمینی در استانهای خراسان شمالی و رضوی با استفاده از آزمونهای سرولوژیکی و مولکولی

پژوهش های حفاظت گیاهان ایران

مقاله 2، دوره 23، شماره 1، مهر 1388   

نوع مقاله: مقالات پژوهشی

شناسه دیجیتال (DOI): 10.22067/jpp.v23i1.1875

نویسندگان

مریم نقیب زاده^* ؛ بهروز جعفرپور؛ ماهرخ فلاحتی رستگار

گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد

چکیده

چکیده
به منظور شناسایی این ویروس در بهار و تابستان 1384 ازمناطق عمده سیب‌زمینی‌کاری استانهای خراسان شمالی و رضوی نمونه برداری صورت گرفت . نمونه های برگی که علائم موزائیک خفیف، پیچیدگی و براق‌شدن برگها را نشان می دادند، جمع آوری شده و در محفظه یخ به آزمایشگاه منتقل شدند. تعدادی غده نیز جمع‌آوری گردید که بعد از گذراندن دوره خواب در دمای 4 درجه سانتی‌گراد در سردخانه، در پاکتهای کاغذی در محیط آزمایشگاه جهت جوانه‌زنی قرار گرفتند. آلودگی نمونه‌های فوق با استفاده از آزمون سرولوژیکی DAS-ELISA و آغازگرهای طراحی شده برای تکثیر ژن پروتئین پوششی (CP) در واکنش RT-PCR انجام گردید. استخراج RNA از نمونه‌های آلوده با استفاده از روش رسوب با PEG6000 انجام گردید و به دنبال آن آزمون RT جهت ساخت cDNA و پس از آن آزمون PCR انجام شد. الکتروفورز محصول PCR در ژل آگاروز 5/1 درصد، قطعه تکثیر شده bp 1100 مربوط به ژن کامل CP را در تمام نمونه‌های مورد آزمایش نشان داد. وجود ناحیه تکثیر شده مزبور در نمونه‌های آلوده نشان از آلودگی به PVA در مناطق بررسی‌شده دارد. تعیین دامنه میزبانی ویروس نیز در شرایط گلخانه بر روی سه گونه گیاهی شامل توتون (Nicotiana abacum var samsun)، توتون (Nicotiana tabacum var Turkish)، گوجه‌فرنگی (Lycopersicum esculentum) مورد بررسی قرار گرفت. به منظور تعیین پراکنش این ویروس نمونه برداری تصادفی از مزارع حومه شهرستانهای مشهد، چناران ،قوچان، شیروان، بجنورد، فاروج، تربت حیدریه، تربت جام، فریمان، کاشمر، اسفراین و نیشابور به عمل آمد و سپس با استفاده از آزمون DAS-ELISA میزان پراکنش این ویروس در مناطق ذکر شده بررسی گردید. نتایج بدست آمده نشان داد که مزارع حومه کاشمر آلوده به این ویروس می باشند و در مزارع سایر شهرستانها آلودگی مشاهده نگردید. این اولین گزارش از وجود ویروس A سیب زمینی در استانهای خراسان شمالی و رضوی می‌باشد.

واژه‌های کلیدی : ویروس A سیب‌زمینی، شناسایی، دامنه میزبانی، DAS-ELISA، RT-PCR