افزایش میزان بیان ژن Sox2 در سلول‌های فیبروبلاست گاوی با استفاده از TALE-TFs

پژوهشهای علوم دامی ایران

مقاله 8، دوره 7، شماره 1 - شماره پیاپی 21، بهار 1394، صفحه 87-95   

نوع مقاله: علمی پژوهشی- ژنتیک و اصلاح دام و طیور

شناسه دیجیتال (DOI): 10.22067/ijasr.v7i1.23821

نویسندگان

یاسمن شمشیرگران¹؛ مجتبی طهمورث پور^{* 2}؛ حسام دهقانی³؛ محمدرضا نصیری⁴

¹گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه بیرجند

²گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران.

³دانشکده دامپزشکی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران

⁴علوم دامی ، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران

چکیده

ژن Sox2 کد کننده یک فاکتور رونویسی موثر در ایجاد و پایداری خاصیت چند توانی سلول های بنیادین پستانداران می باشد. در این مطالعه توانایی Transcription Activator Like-Effector Transcription Factors (TALE-TFs) جهت افزایش بیان اندوژنوس ژن Sox2 در سلول‌های فیبروبلاست گاوی مورد بررسی قرار گرفت. به این منظور در ابتدا 320 جفت باز از منطقه پروموتری ژن Sox2 گاوی توالی یابی شد و در ادامه این توالی با اطلاعات ژنوم انسان موجود در بانک جهانی ژن مقایسه شد. هم‌ردیفی توالی های به دست آمده نشان داد که این منطقه دارای مشابهت 44/93 درصد با منطقه پروموتری ژن Sox2 انسانی است. لذا با توجه به شباهت موجود توالی ها، از یک Sox2-TALE-TF که قبلاً جهت افزایش بیان ژن Sox2 در سلول های انسانی استفاده شده بود برای تست فعالیت TALE-TF ها در سلول های فیبروبلاست گاوی استفاده گردید. جهت اندازه‌گیری میزان فعالیت TALE-TF ها در سلول های فیبروبلاست گاوی از آنالیز بیان ژن (qRT-PCR) و یک سیستم گزارشگر رنگ فلورسنت mCherry تحت کنترل پروموتر minCMV استفاده گردید. بررسی عکس های میکروسکوپ فلورسنت نشان داد که پروموتر minCMV در سلول‌های فیبروبلاست گاوی به شکل کاملاً قوی عمل می کند و به عنوان یک گزارشگر برای فعالیت TALE-TF ها قابل استفاده نیست. آنالیز نتایج بیان ژن Sox2 گاوی با استفاده از تکنیک qRT-PCR نشان داد که بیان ژن Sox2 در سلول های فیبروبلاست گاوی ترانسفکت شده با Sox2-TALE-TF به میزان 529/3 برابر افزایش داشته است. نتایج این تحقیق نشان داد که TALE-TF ها به عنوان فاکتور های رونویسی مصنوعی می‌توانند جهت افزایش بیان اندوژنوس ژن ها در سلول های گاوی به کار برده شوند.

کلیدواژه‌ها

فیبروبلاست گاوی؛ پروموتر minCMV؛ ژن Sox2؛ TALE-TFs

مراجع