استفاده از روش PCR رقابتی و Real-time PCR مطلق به منظور کمی سنجی جمعیت باکتری تولید کننده بوتیرات: بوتیریویبریو فیبری سالونس | ||
| پژوهشهای علوم دامی ایران | ||
| مقاله 7، دوره 7، شماره 4 - شماره پیاپی 24، زمستان 1394، صفحه 486-491 اصل مقاله (701.47 K) | ||
| نوع مقاله: علمی پژوهشی- ژنتیک و اصلاح دام و طیور | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.22067/ijasr.v7i4.36543 | ||
| نویسندگان | ||
| مجتبی طهمورث پور* 1؛ امیر طاهری2؛ محمدهادی سخاوتی2 | ||
| 1گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران. | ||
| 2گروه علوم دامی، دانشکده کشـاورزی، دانشـگاه فردوسـی مشهد، مشهد، ایران | ||
| چکیده | ||
| سویه های باکتری بوتیریویبریو فیبری سالونس به عنوان عمده ترین گروه باکتری های تولید کننده بوتیرات در دستگاه گوارش بسیاری از حیوانات و همچنین انسان شناخته شده اند. در این مطالعه دو تکنیک مبتنی بر DNA شامل PCR رقابتی و Real-time PCR به منظور شمارش باکتری های گونه بوتیریویبریو فیبری سالونس استفاده شدند. در ابتدا آغازگرهای اختصاصی برای منطقه 16S rDNA باکتری بوتیریویبریو فیبری سالونس به منظور تکثیر یک قطعه 213 جفت بازی استفاده شدند. یک قطعه رقابتگر با تفاوت طول 50 جفت باز بیشتر ساخته شد و در ناقل پلاسمیدی pTZ57R/T همسانه سازی شد. کمیت رقابتگر پلاسمیدی با استفاده از نانودراپ اسپکتروفتومتری سنجیده شد و به صورت سریالی رقیق سازی شد. رقت های حاصل به همراه DNA استخراج شده از مایع شکمبه بطور همزمان تکثیر شدند. به منظور کمی سازی محصولات PCR پس از عکس برداری از ژل آگارز و استفاده از نرم افزار ImageJ ، مقادیر تکثیر شده از DNA هدف در مقابل مقادیر تکثیر شده از رقابتگر به صورت لگاریتمی ترسیم شدند. از ضریب تبیین (R2) به عنوان معیاری جهت ارزیابی دقت تکنیک استفاده گردید. برای توسعه Real-time PCR، قطعه 213 جفت بازی تکثیر شده و همسانهسازی شده در ناقل پلاسمیدی pTZ57R/T به منظور رسم منحنی استاندارد استفاده شد. نتایج نشان دادند که هر دو روش قابلیت استفاده برای شمارش باکتری های جنس بوتیریویبریو فیبری سالونس را دارا هستند و بنابراین می توانند به عنوان ابزارهای مناسب در تحقیقات مرتبط با این باکتری مورد استفاده قرار بگیرند. | ||
| کلیدواژهها | ||
| بوتیریویبریو فیبری سالونس؛ کمی سنجی اسیدهای نوکلئیک؛ QCPCR؛ Real-Time PCR | ||
| مراجع | ||
|
| ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 17,632 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 3,240 |
||