تولید و تخلیص ایمونوگلوبین علیه اشرشیاکلای در زرده تخم مرغ

پژوهشهای علوم دامی ایران

مقاله 8، دوره 8، شماره 1 - شماره پیاپی 25، فروردین 1395، صفحه 154-161   

نوع مقاله: علمی پژوهشی- ژنتیک و اصلاح دام و طیور

شناسه دیجیتال (DOI): 10.22067/ijasr.v8i1.36772

نویسندگان

محمدرضا نصیری^{* 1}؛ علیرضا حق پرست²؛ محمد محسن زاده³؛ احمد حسن آبادی⁴؛ خدیجه نصیری¹؛ زهرا رودباری¹؛ محمد دوستی⁵

¹گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی،دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران

²گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران.

³گروه بهداشت مواد غذایی وآبزیان، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه فردوسی مشهد

⁴گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران.

⁵گروه علوم دامی ، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران

چکیده

تخم مرغ به عنوان یک منبع آنتی بادی جایگزین برای پستانداران می باشد. ایمونوگلوبین زرده تخم مرغ از مرغ به تخم مرغ انتقال می یابد و در زرده در مقادیر زیاد تجمع می یابد. ایمونوگلوبینYبه عنوان کاندیدایی برای جایگزینی با آنتی بیوتیک ها مطرح است. هدف از این تحقیق تولید و تخلیص ایمونوگلوبین علیه اشرشیاکلای در زرده تخم مرغ و بررسی حضور آنتی بادی ضد ایکلای در زرده با استفاده از روش سدیم دودسیل سولفات- ژل الکتروفورز پلی اکریل آمیدمی باشد. مرغ های تخم گذار در سه دوره ایمنی زایی با آنتی ژن کامل اشرشیاکلی که توسط فرمالین کشته و همراه با ادجونت کامل فروند در نوبت اول و دوم و با ادجونت ناقص فروند در نوبت سوم ایمن شدند. تخم مرغ ها جهت تخلیص جمع آوری و تخلیص IgY براساس روش پولسون و با استفاده از پلی اتیلن گلیکول 6000 انجام شد. در نهایت با انجام الکتروفورز حضور این آنتی بادی را نشان دادیم. IgY از زرده تخم مرغ با موفقیت خالص سازی گردید. نتایج SDS-PAGE حضور باندهای پروتئینی 27 و 67 کیلودالتونی که موید حضور زنجیره های سبک و سنگین IgY است را نشان دادند. اثرات IgY بر موش ها نشان دادند، موش هایی که IgY را 72ساعت قبل تزریق داخل صفاقی باکتری، به صورت خوراکی در آب آشامیدنی دریافت کردند در برابر باکتری مصون ماندند و همچنین هنگامی که IgY با باکتری به مدت 24 ساعت انکوبه شده و به موش ها تزریق شدند، موش ها در برابر باکتری مقاوم ماندند. نتایج نشان دادند زرده تخم مرغ از مرغ های تخم گذار ایمن شده می تواند به عنوان منبع ایجاد ایمنی غیرفعال مورد استفاده قرار گیرد.

کلیدواژه‌ها

اشرشیاکلیO157:H7؛ آنتی بادی؛ ایمونوگلوبینY؛ مرغ تخم گذار لگهورن

مراجع

1- Callaway, T. R., M. A. Carr., T. S. Edrington., R. C. Anderson., and D. J. Nisbet. 2009. Diet, Escherichia coli O157:H7, and Cattle: Current Issues in Molecular Biology, 11: 67- 80.

2- Carlander, D., H. Kollberg., P. Wejaker., and A. Larsson. 2002. Peroral immunotheraphy with yolk antibodies for the prevention and treatment of enteric infections. Journal of Immunology Research, 21 (1): 1-6.

3- Chae, H. S., N. K. Singh., C. N. Ahn., Y. M. Yoo., S. G. Jeong., J. S. Ham., and D. W. Kim. 2006. Effects of Egg Yolk Antibodies Produced in Response to Different Antigenic Fractions of E. coli O157:H7 on E. coli Suppression. Asian-Australasian Journal of Animal Sciences, 19 (11): 1665-1670.

4- Cipolla, A., J. Cordeviola., H. Terzolo., G. Combessies., J. Bardon., R. Noseda., A. Martinez., D. Medina., C. Morsella., and R. Malena. 2001. Campylobacter fetus diagnosis: direct immunofluorescence comparing chicken IgY and rabbit IgG conjugates. Altex-AlternativenZuTierex-perimenten, 18 (3): 165-170.

5- Cook, S. R., P. K. Maiti., R. DeVinney., E. Allen-Vercoe., S. J. Bach., and T. A. McAllister. 2007. Avian- and mammalian derived antibodies against adherence-associated proteins inhibit host cell colonization by Escherichia coli O157:H7. Journal of Applied Microbiology, 103 (4): 1206-1219.

6- Devi, C. M., M. V. Bai., A. V. Lal., P. R. Umashankar., and L. K. Krishnan. 2002. An improved method for isolation of anti-viper venom antibodies from chicken egg yolk. Journal of Biochemical and Biophysical Methods, 51 (2): 129–138.

7- Gassmann, M., P. Thommes., T. Weiser., and U. Hubscher. 1990. Efficient production of chicken egg yolk antibodies against a conserved mammalian protein. The FASEB Journal, 4 (8): 2528-2532.

8- Goldsby, R. A., T. J. Kindt., J. Kuby., and B. A. Osbome. 2002. Kuby Immunology, 5thEdition.W. H. Freeman

9- Hatta, H., K. Tsuda., S. Akachi., M. Kim., and T. Yamamoto. 1993. Productivity and some properties of egg yolk antibody (IgY) against human rotavirus compared with rabbit IgG.Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, 57 (3): 450-454.

10- Kovacs-Nolan, J., and Y. Mine. 2005. Microencapsulation for the gastric passage and controlled intestinal release of immunoglobulin Y. Journal of Immunological Methods, 296(1-2):199-209.

11- Mine, Y., and J. Kovacs-Nolan. 2002. Chicken egg yolk antibodies as therapeutics in enteric infectious disease: a review. Journal of Medicinal Food, 5 (3): 159-169.

12- Polson, A., M. B. von Wechmar., and M. H. van Regenmortel. 1980. Isolation of viral IgY antibodies from yolks of immunized hens. Immunol Commun, 9 (5): 475-493.

13- Schade, R., C. Staak., C. Hendriksen., M. Erhad., H. Hugl., G. Koch., A. Larsson., W. Pollmann., M. van Regenmortel., E. Rijke., H. Spielmann., H. Steinbusch., and D. Straughnan.1996. The production of avian (egg yolk) antibodies: IgY. Alternatives to laboratory animals, 24: 925-934.

14- Sunwoo, H. H., E. N. Lee., K. Menninen., M. R. Suresh., and J. S. Sim. 2006. Growth Inhibitory Effect of Chicken Egg Yolk Antibody (IgY) on Escherichia coli O157:H7. Journal of Food Science, 67 (4): 1486-1494.

15- Van Nguyen, S., K. Umeda., H. Yokoyama., Y. Tohya., and Y. Kodama. 2006. Passive protection of dogs against clinical disease due to Canine parvovirus-2 by specific antibody from chicken egg yolk. Canadian Journal of Veterinary Research, 70 (1): 62-64.

16- Wang, Q., X. J. Hou., K. Cai., T. Li., Y. N. Liu., W. Tu., L. Xiao., S. Bao., J. Shi., X. Gao., H. Liu., R. Tian., and H. Wang. 2010. Passive protection of purified yolk immunoglobulin administered against Shiga toxin 1 in mouse models. Canadian Journal of Microbiology, 56(12):1003-1010.

17- Warr, G. W., K. E. Magor., and D. A. Higgins.1995. IgY: clues to the origins of modern antibodies. Immunology Today, 16 (8): 392-398.